Paolo REMONDELLI | Progetti

MECCANISMI MOLECOLARI DELL¿ASSEMBLAGGIO DEL RIVESTIMENTO COPII IN CONDIZIONI NORMALI E PATOLOGICHE

Metodologia sperimentale proposta: La distribuzione intracellulare della proteina ricombinante GFP-Sec23A o di proteine ricombinanti GFP-Sec23A F382L e Sec23A M702V, sarà analizzata per microscopia confocale. Le dinamiche di assemblaggio al livello dei siti di uscita saranno analizzate in cellule esprimenti proteine chimeriche Sec23A-GFP normali o mutate mediante Fluorescence Recovery After Photobleaching (FRAP) e Fluorescence Loss in Photobleaching (FLIP). Sarà esaminato il trasporto di proteine reporter (VSVG) e proteine solubili (pro collagene I) in fibroblasti umani in cellule trasfettate con vettori esprimenti Sec23-GFP normali o mutate. Il trasporto di queste proteine sarà seguito attraverso esperimenti di immuno-fluorescenza e mediante marcatura metabolica. Sarà esaminato il livello di accumulo di proteine malconformate e lo stato di attivazione dell'Unfolded Protein Response (UPR) in cellule normali o esprimenti forme mutanti di Sec23.Applicazioni: Il sistema sperimentale proposto rappresenta un utile strumento per la sperimentazione e la valutazione del potenziale terapeutico di farmaci da impiegare per la cura sintomatica della LSD o di altre patologie legate a difetti di COPII.