Carolina CIACCI | Progetti

CELIACHIA E VITAMINA D

Per la diagnosi di celiachia e in alcuni casi anche nel follow-up si deve eseguire una esofagoduodenoscopia con biopsie multiple ( almeno 4). Nel nostro laboratorio, collegato al centro di riferimento regionale per la diagnosi e follow-up della celiachia dell’adulto, è di uso corrente lo studio della mucosa intestinale in coltura [19-21] . E’ una tecnica diagnostica nuova che consente la diagnosi di celiachia nei casi complessi, in cui la negatività degli anticorpi o il fatto che il paziente stesso sia già a dieta rende la biopsia standard di poca utilità. Intendiamo usare questa tecnica diagnostica per studiare gli effetti delle due forme della vitamina D nella modulazione della infiammazione mucosale utilizzando biopsie intestinali coltivate in vitro con e senza gliadina ( il fattore tossico per i celiaci) di 20 pazienti (10 non trattati e 10 a dieta senza glutine). In pratica durante la gastroscopia eseguita come da linee guida per scopi diagnostici si prelevano alcuni frammenti di tessuto destinati all’esame istologico standard e da questi particelle della grandezza di micron da porre in coltura per 24 ore. Ai pozzetti contenenti le particelle si aggiungeranno separatamente le due forme di vitamina D e un peptide della gliadina che induce attivazione dei marcatori dell’infiammazione. Questi marcatori (NF-kB (p65 subunit, Fitzgerald Industries International INC); Thyrosin PY99 (Santa Cruz, Biotecnology, Inc); CD-69 RPE-mouse IgG1 (Pharmigen International, San Diego, USA); COX-2 FITC-mouse IgG1 (Cayman Ann Arbor, US); AIL-2 receptor CD25 (Dako, Copenhagen, Denmark, Mouse Ig); Pharmigen International, San Diego, USA) CD3 Rabbit polyclonal or mouse IgG1, Dako, Copenhagen, Denmark); TG2, anti-TG2 CUB 7402 mAb) si studieranno poi con immunoistochimica su fettine di tessuto congelato subito dopo la coltura. Inoltre avremo la possibilità di studiare la produzione di citochine pro ed anti-infiammatorie rilasciate nel sopranatante della coltura ( IL-8, IL-1β, IL-6, IL-10, IL-15, TGF-beta, TNF-α , Fitzgerald Industries International Inc.).