Pio ZEPPA | Progetti

UTILIZZAZIONE DELLE FTA CARDS PER LA CONSERVAZIONE DI ACIDI NUCLEICI E PER L'IDENTIFICAZIONE DI MUTAZIONI DEI GENI TP53 E ZNF366 NEI CARCINOMI AVANZATI E TRIPLO NEGATVI DELLA MAMMELLA.

Trenta casi consecutivi di carcinomi della mammella, avanzati e/o triplo negativi (BC) saranno acquisiti per lo studio unitamente a 5 linfomi non-Hodgkin (NHL)e a 5 linfonodi reattivi (RLN), arruolati con le stesse procedure ed utilizzati come controllo, mediante biopsia aspirativa per ago sottile (FNA). Il presente progetto è stato approvato dal Comitato Etico Campania Sud (cometicocampaniasud@asl3sud.it). L'FNA sarà eseguita secondo procedura tradizionale; per ogni caso una sospensione cellulare sarà preparata in vivo. Tutti i pazienti saranno arruolati tra quelli afferenti all’Azienda Ospedaliera Universitaria San Giovanni di Dio e Ruggi d’Aragona di Salerno per eseguire FNA mammario per finalità diagnostiche. I pazienti saranno informati delle procedure e firmeranno un consenso informato che include l’assenso all’utilizzazione di parte del materiale diagnostico per scopi di ricerca. Il materiale utilizzato sarà quello residuale alle procedure diagnostiche. Le cellule aspirate saranno sospese in 400µl of PBS (Lonza Walkersville, Inc.) e sarà eseguita una conta cellulare al fine di ottenere sospensioni cellulari con quantità di cellule compresa tra 10x10^2 e 10x10^7. La sospensione sarà divisa in due parti: 260µl saranno conservati a -80°C e 160µl saranno distribuiti nei 4 dischi delle FTA cards (40µl/disco) e conservati nelle apposite buste a temperatura ambiente. I corrispondenti campioni istologici ottenuti successivamente al trattamento chirurgico saranno fissati in formalina e sottoposti all'analisi immunoistochimica routinaria, che consentirà l'identificazione dei casi tripli negativi oggetti dello studio molecolare. Sia dai campioni conservati a -80°C che su FTA cards si estrarrà DNA ed RNA attraverso il legame selettivo del DNA a membrane silica-based della Qiagen atte all'isolamento di materiale genetico presente in tracce. La qualità e l'integrità degli acedi nucleici così ottenuti saranno valutate attraverso l'amplificazione di un gene housekeeping (es. Jak2, GAPDH). Tutti i casi di DNA e RNA estratti da BC tripli negativi saranno utilizzati per la valutazione delle mutazioni nel gene TP53 e nella zinc-finger protein ZNF366. I dati raccolti saranno sottoposti ad analisi statistica e confrontati con i dati presenti in letteratura. Lo studio sarà condotto presso le strutture dell'AOU e dei laboratori dell'Università degli Studi di Salerno.