Massimo AMATO | Progetti

REPERTI ISTOPATOLOGICI DELLA MUCOSA ORALE NEI PAZIENTI CELIACI:STUDIO TRASVERSALE

Il progetto prevede la selezione di un campione di 40 pazienti, composto da 20 pazienti affetti da malattia celiaca in trattamento con dieta priva di glutine (gruppo A), e 20 pazienti affetti da malattia celiaca in assenza di trattamento (gruppo B). I criteri di inclusione per il gruppo di studio prevedono: età maggiore di 18 anni; diagnosi di malattia celiaca; positività agli anticorpi anti transglutaminasi al momento della diagnosi; buona compliance con dieta priva di glutine giudicato da un colloquio con dietologi specializzati (solo per il gruppo A). I criteri di inclusione per il gruppo di controllo saranno: età maggiore di 18 anni; negatività degli anticorpi anti-transglutaminasi, nessun consumo di droga, assenza di malattie gastroenterologiche, assenza di lesioni della mucosa orale. I campioni saranno raccolti sempre dallo stesso operatore. Dopo anestesia locale (mepivacaina e adrenalina 1: 100000) verrà fatta biopsia in mucosa buccale sana, sotto la linea occlusale nella regione del secondo molare inferiore. I campioni verranno fissati in formalina (4% di formaldeide in soluzione pH 7.2) e regolarmente processati in paraffina. Quattro sezioni di tessuto prelevati saranno colorati con ematossilina eosina per la valutazione morfologica. L'indagine immunoistochimica dei sottoinsiemi di cellule T sarà eseguita usando anti CD3 (Rb, SP7, 1: 100, thermo Scientific, Fremont, CA, USA), -CD4 (Ms, 4B12, 01:40, thermo Scientific), -CD8 (Ms, C8 / 144B, 1:30, Dako, Glostrup, Danimarca) e -TCR CγM1 (Ms, γ3.20, 1: 300, Thermo Scientific). La reattività sarà rilevata con EnVision (Dako) o NovoLink Polymer (Leica Microsystems, Newcastle upon Tyne, UK). Dieci campi ad alta potenza di ciascuna biopsia saranno esaminati al fine di valutare i linfociti T nell'infiltrato infiammatorio. Sarà effettuato un conteggio totale dei linfociti T-conteggio per ciascun caso e i valori saranno espressi come Deviazione Standard media. Saranno effettuati campioni duodenali mediante l'ottenimento di sei biopsie duodenali da ciascun paziente. I campioni bioptici,verranno successivamente fissati in formalina 4%, imbevuti in paraffina, colorati con ematossilina eosina. Verrà effettuata immunoistochimica per CD3 e CD8 (Dako, Glostrup, Danimarca) in tutti i casi per meglio identificare e quantificare i linfociti intraepiteliali. La gravità delle alterazioni istopatologiche duodenali sarà valutata in base alla classificazione di Marsh-Oberhuber e alla nuova classificazione proposta da Corazza e Villanacci. Il limite superiore normale per i linfociti intraepiteliali sarà considerato 25/100 cellule epiteliali, secondo i criteri recenti. L'analisi statistica sarà eseguita con STATA® per Mac, mediante ANOVA-test. Lo studio richiede l'approvazione di un Comitato Etico.