Vincenzo CASOLARO | Progetti

RUOLO DELLA SIRT1 NEI MECCANISMI DI COESISTENZA DI BRONCOPNEUMOPATIA CRONICA OSTRUTTIVA E MALATTIE CARDIOVASCOLARI

Al fine di identificare il ruolo delle sirtuine, ed in particolare di Sirt1, nei meccanismi che aumentano il rischio cardiovascolare nei pazienti con BPCO, saranno esaminati pazienti affetti soltanto da BPCO e pazienti con coesistente BPCO/Malattia cardiovascolare. Nel siero dei soggetti selezionati saranno misurati la Sirt1 ed altre sirtuine (Sirt3 e Sirt6). Nel contempo saranno misurati i livelli delle sostanze infiammatorie e di stress ossidativo target dell'azione sirtuinica, coinvolte nella patogenesi delle malattie cardiovascolari e della BPCO.cellule progenitrici endoteliali isolate da ogni paziente saranno condizionate con il siero dei pazienti ed esposte o meno a stress ossidativo. Infine, i dati molecolari saranno correlati sia ai parametri funzionali che ai parametri clinici. Questa ricerca potrà fornire utili informazioni nella identificazione di nuovi biomarcatori di progressione di malattia, che associati e correlati ad altri parametri attualmente disponibili (di natura clinica e strumentale), permetterà di combinare i dati derivanti dalla valutazione molecolare e funzionale.Per l'esecuzione del progetto saranno arruolati pazienti con diagnosi di BPCO in condizioni di stabilità clinica. Al fine di valutare il grado di tolleranza all'esercizio fisico i pazienti saranno sottoposti al test del cammino dei sei minuti (6MWT). Per quantificare l'impatto dei sintomi di BPCO sullo stato di salute dei pazienti sarà utilizzato il questionario CAT (COPD assessment test)mentre per valutare la disabilitàrespiratoria dei pazienti sarà ulilizzata la scala di dispnea del MRC (medical research council).I pazenti con BPCO saranno divisi in 1) pazienti con sola BPCO e 2) pazienti con BPCO e coesistente patologia cardiovascolare.Per l'identificazione dei biomarcatori e dei target terapeutici indice di rischio cardiovascolare nei sieri isolati dai pazienti saranno determinati i livelli di biomarcatori prognostici di BPCO tra cui, la proteina C reattiva (CRP), fibrinogeno ed il peptide natriuretico tipo B (BNP). Quindi saranno valutati i livelli sierici di espressione proteica di Sirt1, Sirt3 e Sirt6. Inoltre, saranno determinati l'espressione (mRNA e proteica)ed il profilo di attività dei target di Sirt1 coinvolti nelle risposte allo stress ossidativo, nei processi infiammatori e di disfunzione endoteliale, tutti processi correlati fra di loro e condivisi sia dalla BPCO che dalle malattie cardiovascolari. Per quanto concerne lo stress ossidativo, sarà stimata l'entità di danno ossidativo sulle membrane, sul DNA e sulle proteine, misurando i corrispettivi markers ossidativi. Per misurare la capacità del sistema antiossidante, saranno misurati l'mRNA, l'espressione proteica ed i livelli di attività di enzimi antiossidanti quali la superossidodismutasi SOD1-3), la catalasi (Cat) e la glutatione perossidasi (GPx). Per valutare la disfunzione endoteliale, saranno misurati la biodisponibilità di ossido nitrico (NO)e l'espressione e l'attività della NO sintetasi endoteliale (eNOS). Infine, per quanto concerne l'infiammazione, sarà misurata l'attività del fattore nucleare kappa B (NF-kB)ed attraverso una determinazione citochinica multiplex saranno misurati nei sieri dei pazienti i livelli di IL-1beta, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12, IL-13, IFN e TNF. Infine i dati clinici e funzionali saranno correlati ai risultati molecolari.