RAFFAELLA BELVEDERE | Progetti

RUOLO DELL'ANNESSINA A1 NELLA PROGRESSIONE TUMORALE

Le linee cellulari utilizzate saranno: MIAPaCa2, BxPc-3, CAPAN-2, PANC-1 (cellule di carcinoma pancreatico duttale umano) e AsPC-1 (cellule di carcinoma pancreatico umano, metastasi di ascite), con esse saranno creati modelli in vitro trasfettati con: siRNA down-modulanti ANXA1e plasmidi iper-esprimenti ANXA1. Su questi modelli sarà fatta l’analisi dell’espressione e localizzazione dell’ANXA1 mediante Western blotting e immunofluorescenza, su estratti cellulari totali e compartimentalizzati (surnatanti-membrana-citosol-nucleo). Allo scopo di indagare specifici processi cellulari quali la migrazione attraverso saggi di Wound Healing mediante l’utilizzo della microscopia TIME LAPSE, di invasione attraverso la camera di Boyden e/o saggi di formazione e invasione di sferoidi in vitro, di adesività eseguendo un saggio di adesione su coating di collagene, laminina e fibronectina. Al fine di dimostrare l’interazione dell’ANXA1 con i recettori per i formil-peptidi (FPR), in particolar modo nei processi di migrazione e invasione cellulare, saranno innanzitutto eseguite analisi per citofluorimetria e Western blotting, per valutare l’espressione di FPR 1-2-3. Parallelamente saranno utilizzate anche le linee DU145 (cellule di carcinoma prostatico umano, ormone-indipendente) e DU145R80 (clone delle DU145 resistente allo zoledronato) trasfettate in modo analogo a quanto descritto per le linee cellulari di PDAC umano. Allo scopo di indagare la risposta ai chemioterapici, saranno valutati il ciclo cellulare e l’apoptosi.I modelli cellulari utilizzati saranno incubati in tempi diversi a 37°C in una camera per l’ipossia insufflata con miscela di N2/CO2 e su di essi sarà verificata la EMT attraverso la valutazione della transizione citosol-nucleo della β-catenina, l’aumento dell’espressione della vimentina, marker mesenchimale, e la diminuzione della E-caderina, marker epiteliale, sia per Western blotting che per immunofluorescenza. Infine, sulle cellule in ipossia, saranno identificati l’espressione, la localizzazione e il ruolo dell’ANXA1 con tecniche quali Western blotting e immunofluorescenza, nonché la risposta apoptotica alla gemcitabina su cellule di PDAC umano e allo zoledronato sulle linee cellulari di carcinoma prostatico sia per PI al FACSCalibur che con caspasi-3 per Western blotting.Elenco delle pubblicazioni selezionate1) Bizzarro V, Fontanella B, Carratù A, Belvedere R, Marfella R, Parente L, Petrella A. (2012). Annexin A1 N-Terminal Derived Peptide Ac2-26 Stimulates Fibroblast Migration in High Glucose Conditions. PLOS ONE, vol. 7, p. e45639, ISSN: 1932-6203, doi: 10.1371/journal.pone.00456392) Marfella R, Sasso FC, Cacciapuoti F, Portoghese M, Rizzo MR, Siniscalchi M, Carbonara O, Ferraraccio F, Torella M, Petrella A, Balestrieri ML, Stiuso P, Nappi G, Paolisso G. (2012). Tight Glycemic Control May Increase Regenerative Potential of Myocardium during Acute Infarction.. THE JOURNAL OF CLINICAL ENDOCRINOLOGY AND METABOLISM, vol. 97, p. 933-942, ISSN: 0021-972X3) Bizzarro V, Belvedere R, Dal Piaz F, Parente L, Petrella A. (2012). Annexin A1 Induces Skeletal Muscle Cell Migration Acting through Formyl Peptide Receptors. PLOS ONE, vol. 7(10), p. e48246, ISSN:1932-6203, doi: 10.1371/journal.pone.00482464) COSIMO WALTER D’ ACUNTO, BIANCA FONTANELLA, RODRIQUEZ MANUELA, MAURIZIO TADDEI, LUCA PARENTE, ANTONELLO PETRELLA (2010). Histone deacetylase inhibitor FR235222 sensitizes human prostate adenocarcinoma cells to apoptosis through up-regulation of annexin A1. CANCER LETTERS, vol. 295, p. 85-91, ISSN: 0304-3835, doi: 10.1016/j.canlet.2010.02.0165) M. FESTA, A. PETRELLA, S. ALFANO, PARENTE L. (2009). R-roscovitine sensitizes anaplastic thyroid carcinoma cells to TRAIL-induced apoptosis via regulation of IKK/NF-kB pathway. INTERNATIONAL JOURNAL OF CANCER, vol. 124, p. 2728-2736, ISSN: 0020-7136