Valeria CONTI | Progetti

TERAPIA CON IDROSSICLOROCHINA (HCQ) IN PAZIENTI AFFETTI DA LUPUS ERITEMATOSO SISTEMICO: CORRELAZIONE TRA LIVELLI SIERICI DI HCQ E QUALITÀ DI VITA

Ai fini del presente progetto di ricerca saranno analizzati campioni di sangue intero eparinizzato e conservato a -20°C proveniente da una coorte di pazienti affetti da LES e arruolati presso l'Ambulatorio per il Lupus sistemico della Seconda Università degli Studi di Napoli (Direttore: Prof. Gabriele Valentini) nell'ambito di uno studio clinico precedentemente approvato dal Comitato Etico. La popolazione in esame risponde a specifici criteri di inclusione e di esclusione che prevedono, tra gli altri: - Età superiore ai 18 anni; - Trattamento con HCQ ad una dose quotidiana stabile praticato da almeno sei mesi; - Assenza di anamnesi di precedenti reazioni avverse all’HCQ; - Stima della filtrazione renale glomerulare inferiore ai 60 ml/min; - Assenza di insufficienza epatica, alcolismo cronico, fibromialgia, disordini psichiatrici noti, alterata funzione tiroidea e anemia. Il sangue intero dei pazienti verrà sottoposto ad estrazione organica utilizzando diversi solventi organici quale etere dietilico, diclorometano, cloroformio e loro miscele. Il prodotto dell'estrazione verrà risospeso in un opportuno tampone ed analizzato via HPLC utilizzando standard commerciali per l'idrossiclorochina (HCQ) e relativi metaboliti quali la desetilidrossiclorochina (DHCQ), la desetilclorochina (DCQ) e la didesetilclorochina (DDCQ). Verranno utilizzate e confrontate a tal proposito diverse metodiche presenti in letteratura alfine di identificare e successivamente ottimizzare la migliore procedura di estrazione organica. Come standard interno per la valutazione delle diverse procedure estrattive utilizzate verrà usato il 2,3 diamminonaftalene. I campioni in esame verranno analizzati e quantizzati sia mediante analisi HPLC sia attraverso spettrometria di massa (LC-MS). Le due tecniche saranno confrontate alfine di identificare l'approccio metodologico migliore per consentire un accurato dosaggio della idrossiclorochina e dei suoi metaboliti nel sangue intero. Tutti i pazienti saranno sottoposti a prelievo venoso per il dosaggio della idrossiclorochina circolante ogni 3-6 mesi per due anni. Successivamente sarà quindi valutata l'eventuale correlazione tra i livelli circolanti di HCQ, DHCQ, DCQ e DDCQ e quelli, tra gli altri, di VAS dolore, VAS fatica, VAS stato di salute generale. I risultati di questa prima fase del presente progetto di ricerca consentiranno eventualmente di stabilire un cutoff di concentrazioni sieriche di farmaco associate a un miglior controllo delle manifestazioni cliniche elencate precedentemente, anche nel paziente in remissione. In una seconda fase del progetto, dai campioni ematici di ciascun paziente verrà estratto il DNA genomico che verrà utilizzato in reazioni di PCR per verificare la presenza dei polimorfismi CYP2D6*3, CYP2D6*4, CYP2D6*5, CYP2C8*3, CYP2C8*4 sia in omozigosi che in eterozigosi. Si procederà quindi alla valutazione di una eventuale correlazione tra elevati/bassi livelli di HCQ e relativi metaboliti e assettogenetico dei pazienti analizzati.