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TECNOLOGIE RICOMBINANTI

Alessandra TOSCO TECNOLOGIE RICOMBINANTI

0760200042
DIPARTIMENTO DI FARMACIA
CORSO DI LAUREA MAGISTRALE A CICLO UNICO DI 5 ANNI
CHIMICA E TECNOLOGIA FARMACEUTICHE
2020/2021

ANNO ORDINAMENTO 2016
PRIMO SEMESTRE
CFUOREATTIVITÀ
540LEZIONE
ALESSANDRA TOSCO T Curriculum
Obiettivi
L’INSEGNAMENTO È VOLTO ALLA ACQUISIZIONE DELLE CONOSCENZE E ALLA COMPRENSIONE DELLE PRINCIPALI TECNICHE DI BIOLOGIA MOLECOLARE (CLASSICHE E INNOVATIVE) UTILIZZATE PER LA PREPARAZIONE, L’ANALISI E LA MANIPOLAZIONE DI ACIDI NUCLEICI E PROTEINE.
LO STUDENTE, APPLICANDO LE COMPETENZE ACQUISITE, DOVRÀ ESSERE IN GRADO DI ANALIZZARE ED AFFRONTARE PROBLEMATICHE CONNESSE ALL’ANALISI DELL’ESPRESSIONE GENICA E ALLA PRODUZIONE DI PROTEINE RICOMBINANTI, ANCHE UTILIZZATE COME FARMACI BIOTECNOLOGICI
Prerequisiti
E' RICHIESTO IL CONSEGUIMENTO DEGLI OBIETTIVI RELATIVI ALLE SEGUENTI DISCIPLINE: BIOLOGIA, CHIMICA ORGANICA, BIOCHIMICA GENERALE ED È FORTEMENTE CONSIGLIATA L’ACQUISIZIONE DEGLI OBIETTIVI RELATIVI ALLA BIOLOGIA MOLECOLARE.
Contenuti
ANALISI DEL DNA E DELL’RNA: PURIFICAZIONE DEL DNA GENOMICO E PLASMIDICO E DELL’RNA; ANALISI QUANTITATIVA E QUALITATIVA: SPETTROFOTOMETRIA, ELETTROFORESI E METODI DI TRASFERIMENTO (6 ORE DI LEZIONI TEORICHE).
ENZIMI DI RESTRIZIONE E MODIFICAZIONE, TRASFORMAZIONE BATTERICA, I VETTORI DI CLONAGGIO, PLASMIDI; VETTORI LAMBDA, M13 E COSMIDICI; I CROMOSOMI ARTIFICIALI: YAC, PAC, BAC E HAC (6 ORE DI LEZIONI TEORICHE).
LA PRODUZIONE DI PROTEINE RICOMBINANTI: ESPRESSIONE IN E. COLI; I VETTORI DI ESPRESSIONE; I PROMOTORI COSTITUTIVI E INDUCIBILI; ESPRESSIONE IN LIEVITO: S. CEREVISIAE, P. PASTORIS, S. POMBE, ESPRESSIONE IN CELLULE DI INSETTO E IN CELLULE DI EUCARIOTI SUPERIORI. L’UTILIZZO DELLE PROTEINE RICOMBINANTI NELLA RICERCA SCIENTIFICA E NELL’INDUSTRIA FARMACEUTICA, I FARMACI BIOTECNOLOGICI (4 ORE DI LEZIONI TEORICHE).
LA PCR E LE SUE APPLICAZIONI IN CAMPO BIOMEDICO: CONDIZIONI DI REAZIONE; PCR QUANTITATIVA; LA PCR NELLA DIAGNOSI DI MALATTIE GENETICHE; IL TEST DI PATERNITÀ; LE APPLICAZIONI FORENSI (3 ORE DI LEZIONI TEORICHE).
IL SEQUENZIAMENTO DEL DNA: LE TECNICHE DI BASE PER IL SEQUENZIAMENTO; IL SEQUENZIAMENTO DEI GENOMI; IL PROGETTO GENOMA UMANO. STRATEGIE DI CLONAGGIO DEI GENI: LE LIBRERIE DI DNA GENOMICO E DI CDNA; ANALISI DI UNA GENOTECA; L’IBRIDAZIONE, IL CHROMOSOME WALKING E L’ANALISI DIFFERENZIALE (4 ORE DI LEZIONI TEORICHE).
ANALISI DI UN PROMOTORE: COSTRUZIONE DI PLASMIDI REPORTER; SAGGIO DELLA MOBILITÀ ELETTROFORETICA; FOOTPRINTING; IMMUNOPRECIPITAZIONE DELLA CROMATINA (3 ORE DI LEZIONI TEORICHE).
STUDIO DELLE INTERAZIONI PROTEINA-PROTEINA: IL DOPPIO IBRIDO; LA COIMMUNOPRECIPITAZIONE; IL “FISHING FOR PARTNERS”; L’ANALISI MEDIANTE TECNOLOGIA SPR (2 ORE DI LEZIONI TEORICHE).
TRASFERIMENTO DI GENI IN CELLULE ANIMALI: COLTURE CELLULARI; TECNICHE DI TRASFEZIONE. MANIPOLAZIONE GENETICA DI ANIMALI: INIEZIONE NEL PRONUCLEO; CELLULE STAMINALI EMBRIONALI; METODI PER LA PRODUZIONE DI TOPI TRANSGENICI; TRASFERIMENTO DI DNA IN ALTRI VERTEBRATI; TERAPIA GENICA. ANALISI POST-GENOMICHE: I CAMBIAMENTI GLOBALI DELL’ESPRESSIONE GENICA; MICROARRAY; ANALISI PROTEOMICHE (2 ORE DI LEZIONI TEORICHE).

IN LABORATORIO
PREPARAZIONE DI UNA REAZIONE DI PCR, ALLESTIMENTO DI DIGESTIONI SINGOLE E DOPPIE PER LA COSTRUZIONE DI UNA MAPPA DI RESTRIZIONE. CONTROLLO DELLE DIGESTIONI ENZIMATICHE E DELLE PCR TRAMITE ELETTROFORESI SU GEL DI AGAROSIO (4 ORE DI ESERCITAZIONE PER GRUPPI DI 2/3 PERSONE)
PREPARAZIONE DI UNA REAZIONE DI LIGASI, TRASFORMAZIONE IN CELLULE COMPETENTI, PIASTRAMENTO SU TERRENO SELETTIVO. COSTRUZIONE DI UNA RETTA DI TARATURA CON
METODO DEI MINIMI QUADRATI, ESTRAPOLAZIONE DEI PESI MOLECOLARI DEI FRAMMENTI DI DIGESTIONE (3 ORE DI ESERCITAZIONE PER GRUPPI DI 2/3 PERSONE)
DISCUSSIONE DELLA MAPPA DI RESTRIZIONE. CONTROLLO DI COLONIE RICOMBINANTI. ESTRAZIONE DI DNA PLASMIDICO TRAMITE LISI ALCALINA (3 ORE DI ESERCITAZIONE PER GRUPPI DI 2/3 PERSONE).
Metodi Didattici
L’INSEGNAMENTO PREVEDE 30 ORE DI LEZIONI FRONTALI CHE SI SVOLGONO IN AULA CON L’AUSILIO DI PROIEZIONI POWERPOINT E 10 ORE DI ESERCITAZIONI CHE SI SVOLGONO IN LABORATORIO E PREVEDONO L'APPROFONDIMENTO SPERIMENTALE DELLE TECNICHE DI BASE DI MANIPOLAZIONE E ANALISI DEGLI ACIDI NUCLEICI
Verifica dell'apprendimento
IL RAGGIUNGIMENTO DEGLI OBIETTIVI DELL’INSEGNAMENTO È CERTIFICATO MEDIANTE IL SUPERAMENTO DI UN ESAME CON VALUTAZIONE IN TRENTESIMI. L’ESAME PREVEDE UNA PROVA ORALE, DI DURATA NON SUPERIORE A 30 MINUTI, CHE CONSISTE IN UN COLLOQUIO CON DOMANDE E DISCUSSIONE SUI CONTENUTI TEORICI INDICATI NEL PROGRAMMA DELL’INSEGNAMENTO ED È FINALIZZATA AD ACCERTARE IL LIVELLO DI CONOSCENZA E CAPACITÀ DI COMPRENSIONE RAGGIUNTO DALLO STUDENTE, NONCHÉ A VERIFICARE LA CAPACITÀ DI ESPOSIZIONE RICORRENDO ALL'APPROPRIATA TERMINOLOGIA E LA CAPACITÀ DI ORGANIZZAZIONE AUTONOMA DEGLI ARGOMENTI STESSI.
IL VOTO MINIMO PER IL SUPERAMENTO DELL’ESAME È DI 18/30. LA LODE POTRÀ ESSERE ATTRIBUITA AGLI STUDENTI CHE RAGGIUNGERANNO IL VOTO MASSIMO DI 30/30 E DIMOSTRERANNO DI ESSERE IN GRADO DI APPLICARE AUTONOMAMENTE CONOSCENZE E COMPETENZE ACQUISITE ANCHE IN CONTESTI DIVERSI DA QUELLI PROPOSTI A LEZIONE.
Testi
TESTO DI RIFERIMENTO:
REECE R.J.-ANALISI DEI GENI E DEI GENOMI -EDISES- ISBN: 8879593463
TESTI CONSIGLIATI PER APPROFONDIMENTI:
BROWN T.A.-BIOTECNOLOGIE MOLECOLARI-ZANICHELLI-ISBN: 978-88-08-16746-0
GLICK B.R., PASTERNAK J.J. - BIOTECNOLOGIA MOLECOLARE-ZANICHELLI- ISBN: 8808-14696-0
Altre Informazioni
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  BETA VERSION Fonte dati ESSE3 [Ultima Sincronizzazione: 2022-05-23]